trxpet
A. 蛋白的表達與純化
蛋白表達純化已經是非常經典簡單的實驗了,沒有LSS說的那麼嚇人。
說說我的蛋白表達純化以及下面的單抗製作工作總體設計概要吧:
1 首先要知道你要純化蛋白的編碼DNA序列,查閱相關文獻,看目的基因在那些細胞或者組織中高表達,進而設計該基因的引物,擴增出目的DNA片段的ARF。這一布叫目的基因片段的獲取
2 構建表達載體:根據你獲得的基因本身的特性確定原核或者真核載體中表達,這一步的主要問題就是構建帶有目的基因的質粒,導入表達系統中。一般原核表達時間短,成本低,表達量大,常優先考慮;但是有些基因在E coli中就是表達不出,可能是密碼子優化等出現問題,也或者是由於想純化得到更好的活性蛋白的考慮(原核的蛋白折疊系統顯然沒有真核的好),有很多研究者選擇在畢赤酵母中表達。(我手裡就有相關資料,因為以前做過表達純化及後來的單抗制備),這一步再強調一下,優化密碼子對於蛋白的成功表達很重要
3 載體構建好了,下面就是重組蛋白的表達了。這一過程涉及到用多少的誘導劑,誘導多少時間才能得到最多的蛋白的問題,即優化表達條件。就是在上述不同量誘導劑誘導條件下,取菌體上清(分泌型)或者破碎細胞(胞內表達的蛋白)電泳,看是否得到目的分子量大小的蛋白
4 蛋白表達成功,下面是根據蛋白質本身親水/疏水,電荷帶電特性等確定蛋白純化的方法。一般步驟:離心,取蛋白所在的相
如果是分泌表達的蛋白,則取上清,超濾,沒有超濾儀器可以用透析袋等代替,用離子交換柱層析。基本上這一步能得到純化的95%的蛋白,電泳鑒定基本不會看到有雜帶出現。如果還是純度不符合要求,可以在表達蛋白最初在構建表達載體質粒的時候在蛋白的ORF後面加上HIS-標簽,這樣得到的蛋白不但可以用於HIS柱的進一步純化,在不確定自己的融合蛋白是否有表達的時候,也可以單單用抗HIS的抗體做一WB,分析確認目的蛋白是否表達,這是蛋白表達的常用手段。
5 經過純化後的蛋白仍然含有一部分無機鹽,如果需要的話可以將蛋白經真空凍干機凍干,得到純蛋白。
我們實驗室做出來的一個蛋白,編碼序列GC含量高75達%,但是功夫不負有心人,只要你想做那件事情,積極的尋找解決問題的手段,總會搞定的,沒有跨不過的坎。如果坎太寬,搭橋解決總行。
B. pet32的促溶標簽多大
pet32的促溶標簽32X19mm。
尺寸:寬32*高19MM)左下角白色小標簽為本產品目前市面上的液晶屏幕保護貼,通透度達99%。
pET-32C質粒是一個大腸桿菌表達載體,T7啟動子驅動TrxA促溶標簽和目的蛋白融合表達,PET具有較好硬脆性,可以耐一定的高溫,抵禦惡劣的環境,防酸鹼等化學品的腐蝕,非常適用於戶外和較高品質要求的標簽。
C. pet32a切除標簽
這個我剛好做過,用腸激酶切除~~用Ni-NTA鎳柱純化,你給我個郵箱,方法我發給你
D. 什麼是詞根
。(詞根和詞綴叫構詞語素)也就是說,單詞一般由三部分組成:詞根、前綴和後綴。詞根決定單詞意思,前綴改變單詞詞義,後綴決定單詞詞性。
[編輯本段]主要詞根
詞根 詞根解釋 例詞 ache=ache 痛 earache 耳痛 ag=do, act 做,動 agent 代理人 agri, agro=agriculture 田地,農田 agriculture 農業,農藝 ann, enn=year 年 annual 每年的,年度的 astro, aster=star 星 astronomy 天文學 audi, audit=hear 聽 audible 聽得見的 bell=war 戰爭 rebellion 反叛,反抗 bio, bi=life 生命,生物 biology 生物學 brev=short 短 abbreviate 縮短,節略 ced, ceed=go 行走 precedent 先行的,在前 cept=take 拿,取 exception 例外,除外 circ=ring 環,,圓 circle 圓,圈,環狀物 cid, cis=cut, kill 切,殺 suicide 自殺 claim, clam=cry, shout 喊叫 exclaim 呼喊,驚叫 clar=clear 清楚的,明白的 clarify 澄清;使清楚 clud, clus=close, shut 關閉 exclude 排斥,拒絕,接納 cogn=know 知道 cognition 認知 cord=heart 心 cordial 衷心的,誠心的 corpor, cor=body 體 corporation 團體,社團 cred=believe, trust 相信,信任 credibility 可信,可靠, cruc=cross 十字 crucify把……數答釘在十字桇上;折磨 cur=care 關心,掛念,注意 security 安全 cru, crus, cour, cours=run 跑 cruise巡航艦 di=day 日 diary 日記 dit=give 給 edit 編輯 dict,dic=say 言,說 dictator 獨裁者,口授者 c, ct=lead 引導 conct 引導,指導,經營 ed=eat 吃 edible 可以吃的,食用的 ev=age 年齡,時代 longevity 長壽,長命 fact, fac=do, make 做,作 factory 工廠 fer=bring, carry 帶,拿 different 不同的,相異的 flor, olour=flower 花 florid 如花的,華麗的 flu=flow 流 fluency 流利,流暢 fus=pour 灌,流,傾瀉 refuse 拒絕,拒受 geo=earth 地 geography 地理學 gon=angle角 trigon 三角形 grad=step, go, grade 步,走,級 graal 逐步的 gram=write 寫 telegram 電報 graph=write, writing 寫,畫 photograph 照相,拍照 gress=go, walk 行走 progress 進步 hap=chance,luck,accident 機會,偶發 happen 發生,巧遇好殲 hibit=hold 拿,持 exhibit 展出,展覽 hospit, hosp=guest 客人 hospitable 好客的 idio=particular, own, private, proper 特殊的,個人的,專有的 idiom 慣用語,方友畢沖言 insul=island 島 insular 島的,偏狹的 it=go 行走 exit 出口,退出 ject=throw 投擲 projection 投擲,發射 lect, leg, lig=choose, gather 選,收 elect 選舉 lev=raise 舉、升 elevate 抬起,使升高 liber=liberty 自由 liberation 解放 lingu=language 語言 linguist 語言專家 liter=letter 文字,字母 literate 識字的,有文化的 loc=place 地方 local 當地的 log=speak 言,說 dialogue 對話 loqu=speak 言說 eloquent 有口才的,雄辯的 lun=moon 月亮 lunar 月亮的,似月的 nanu, man=hand 手 manuscript 手稿 mar=sea 海 marine 海上的,航海的 medi=middle 中間 mediate 居中調解,調停 memor=memory,mindful 記憶,記住的 memory 記憶,記憶力 milit=soldier 兵 military 軍事的,軍隊的 mini=small,less 小 minimum 最小數 mir=wonder 驚奇,驚異 admire 贊賞,欽佩 mort=death 死 mortal 終有一死的 mot=move 移動 motion 運動,動 nomin=name 名 nominal 名義上的,有名無實的 nov=new 新 novel 新的,新奇的 numer=number 數 numeral 數字,[語]數詞 oper=work 工作 operation 手術,工作,操作 ori=rise 升起 orient 東方,東方的 paci=peace 和平 pacify 使和平,撫慰 past=feed 喂,食 pasture 放牧、牧場,吃草 pel=push, drive 推,逐,驅 propel 推動 pend, pens=hang 懸掛 pendent 懸空的,懸而未決的 pet=seek 追求 compete 競爭,比賽 phon=sound 聲音 phone 電話 plen=full 滿,全 plenty 大量,豐富 pone=put 放置 postpone 推後,推遲 popul=people 人民 population 人口,全體居民 port=carry 拿,帶,運 import 輸入,進口 pos=put 放置 expose 揭露,揭發 preci=price 價值 precious 寶貴的,珍貴的 pur=pure 清,純 purify 使純凈 rect=right, straight 正,直 correct 改正,糾正 rupt=break 破 rupture 破裂,使裂開 sal=salt 鹽 salary 薪水 sci=know 知 science 科學 sec, sequ=follow 跟隨 sequence 繼續,連續 sect=cut 切割 section 切開,一部分 sent, sens=feel 感覺 sentiment 感情,思想感情 son=sound 聲音 sonic 聲音的,音速的 spect=look 看 spectate 出席,觀看 spir=breathe 呼吸 inspire 鼓舞,吸入 tail=cut 切,割 tailor 裁縫,成衣商 tain, ten=hold 握,持,守 contain 容納,包含,內裝 tect=cover 掩蓋 detect 偵查,發覺 tempor=time 時 temporary 暫時的,臨時的 tend, tens=draw 拉 tension 拉緊,引力 tent, tract=draw 拉,抽,引 tractor 拖拉機 urb=city 城市 suburb 郊區,近郊 ut=use 用 utility 效用, 有用 vac, vacu=empty 空 vacancy 空白,空虛 vad, vas=walk, go 行走 invasion 入侵,侵略 vari=change 變化 variable 可變的,反復的 ven=come 來 convene 召集(會議),集會 vert, vers=turn 轉 subvert 推翻,顛覆 vi, via=way 路 via 取道,經由 vis, vid=see 看 visible 可見的,看得見的 vit=life 生命 vital 充滿活力的 viv=live 活 vivid 活潑的,有生氣的
[編輯本段]前綴形式
開放分類:英語、語法、學習、詞彙 [prefix]以結合形式出現,與一詞、詞根或短語開頭的一個音或連續幾個音相接,或書寫中一個字母或連續幾個字母用以產生出派生詞或變化形式。漢語里指在詞根前面的構詞成分。如「阿哥」、「阿姨」中的「阿」 英文中: 一個英語單詞可以分為三個部分:前綴(prefix),詞根(stem)及後綴(suffix)。單詞中位於詞根前面的部分就是前綴。前綴,可以改變單詞的意思。 常見的前綴有如下幾類:第一類:表示正負(或增減)的,如:un-in-im-il-ir-non-mis-mal-dis-anti-de-under-re-over-等;第二類表示尺寸的,如:semi-equi-mini-micro-macro-mega-等;第三類表示位置關系,如:inter-super-trans-ex-extra-sub-infra-peri-等;第四類表示時間和次序,如:ante-pre-prime-post-retro-等;第五類表示數字,如:semi-mono-bi-tri-quad-penta-hex-sept(em)-oct-dec-multi-等;其它類別,如:pro-auto-co-con-等。
一.表示否定的前綴
1.dis-加在名詞、形容詞,動詞之前。 disadvantage(缺點)dishonorable(不光彩的)disagree(不同意) 2.in-加在形容詞,名詞之前 incorrect(不正確的),inability(無能,無力),inaccurate(不準確的) 3.im-加在字母m,b,p之前 impossible(不順能的),impolite(不禮貌的),impudence(厚顏無恥) 4.il-加在以l開頭的詞前 illegal(非法的),illiterate(文盲的,無文化的)illogical(不合邏輯的) 5.ir-加在以r開頭的詞前 irregular(不規則的),irresistable(不可抵抗的),irresolvable(不能分解的,不能解決的) 6.un-加在名詞,形容詞,副詞之前 unfinished(未完成的)undoubted(無疑的)unemployment(失業) 7.non-加在形容詞,名詞前 non-existence(不存在),non-essential(不主要的),non-electrical(非電的) 8.mis-加在動詞、名詞之前 misunderstand(誤解),misjudge(誤判),misleading(誤導),misfortune(不幸) 9.dis-加地動詞之前 disappear(消失),disarm(解除武裝),disconnect(失去聯系) 10.de-加在名詞,形容詞之前 demobilize(遣散;使…復員)decolor(脫色,漂白) 11.anti-加在名詞、形容詞之前 anti-Japanese(抗日戰爭),anti-social(厭惡社會的,反社會的),antidote(解毒葯) 12.counter-加在名詞、動詞前 counterattack(反攻,反擊),counteract(抵抗,阻礙)counterrevolution(反革命) 13. a-在名詞前,表示相反,加強 arrest,affluent
二.表示「前before」的前綴
1.pre- preconception(成見),pre-exsiting(先於……而存在的),pre-selection(選舉前的)preface(前言) 2.Ante- anteroom(前室,接待室),antecessor(先行者,先驅者) 3.Fore- forehead(前額),foreground(前景),foreman(工頭,領班),foresee(預見,先見),foretell(預言) 4.Pro- programme(計劃),prologue(序幕) 5.Ex- ex-president(前任總統)ex-wife(前妻)
三.表示其他的前綴
表示「後-post」的前綴 1.post- post-war(戰後),post-plsition(後置詞),postmeridian(下午) 表示「低」、「下」的前綴 1.Hypo- Hypocrisy(偽善,虛偽),hypothesis(假設),hypochlorite(次氯酸鹽) 2.Infra- Infra-red(紅外線),infrahuman(低於人類的),infrasonic(亞聲的,次聲的) 3.Sub- Sub-editou(副編輯),sub-way(地鐵),sub-conscious(下意識的),submarine(海下的),subtropical(亞熱帶的),subtitle(副標題) 表示「回」、「再次」、「向後」的前綴 1.Re- Refuel(給…加油),retranslate(再譯),reinforce(加強),reconstruct(重建),return(返回) 2.Retro- Retrograde(倒退的),retrospect(回顧) 表示「共同」、「和」的前綴 1.Co- co-exist(共存),co-operate(合作),co-ecation(男女同校) 表示「相互」、「之間」的前綴 1.Inter- Interchangeble(可互換的),interdipendert(互相依靠的),international(國際的),inter-national(交往) 表示「出」、「超出」的前綴 1.Ec- Eclipse(蝕),ecstasy(狂想) 2.Extra- Extraordinary(非凡的),extramural(校外的),extrasensory(超感覺的) 表示「超過」的前綴 1.hyper-,preter-,super-,sur-,ultra- hyper-sensitive(過敏的),preterhuman(超人的)
其它的前綴
1.auto-自 automatic(自動的),auto-autobilgraphy(自傳) 2.mal-壞,惡 Malnutrition(營養不良),maltreat(虐待) 3.Micro- Microscope(顯微鏡),microtome(切片機) 4.Tele-遠 Telegram(電報),telephone(電話),telescope(望遠鏡) 5.Demi-,semi-hemi- Semi-circle(半圓),hemisphere(半球),demilune(半月,新月) 6.Uni-,mono-(單一,單獨) Monotone(單調),monologue(獨白),uniform(制服) 7.Bi-,di-二 Biyearly(二年一次的),biweekly(二周一次的),dichloride(二氯化物) 8.Tri-三 Triangle(三角),tripld(三角架) 9.Multi-多 multi-colored(顏色多樣的),multi-national(多國的) 10.Poly–多 Polygon(多角形),polytomic(多原子的) 11.Arch-首領 archbishop(大主教),architect(建築師) 12.bene-善,好 benefit(利益),benevolence(善意) 13.homo-同 homosexual(同性戀的),homograph(同形異義字) 14.neo新 neo-colonialism(新殖民主義),neolithic(新石器時代的) 15.ortho-正確,直 orthogonal(直角的),orthodox(正統) 16.philo-摯愛 philosopher(哲學家) 17.proto-原始 protohydrogen(初氫),prototype(原型),protoplasm(原生質) 18.pseudo-假的,偽的,冒充的 pseudonym(匿名),pseudo-communism(假共產主義) 19.a-,ab-,abs-(只有在t,c之前)從,自 avoid(避免),absent(缺少的),abstain(抑制),abstract(吸引) 20.Apo-,aph-來自 apology(道歉,謝罪),apostle(倡言者,先驅) 21.se-分離 separation(分開),secure(安全的),sedition(煽動叛亂) 22.para-防 parachute(降落傘), 23.omni-所有的,公共的 omnibus(公共汽車),omnipotence(萬能) 24.pan-全,泛 Pan-American(全美的),pancean(萬靈葯),panorama(風景的全貌;萬花筒) 25.panto-全 pantisocracy(烏托邦大同世界),pantoscopic(視野廣大) 26.dia-通過,藉以 diagonal(對角的),diagnosis(診斷),dialogue(對話) 27.Per-通過,徹底,不利 perambrlate(走來走去),perfect極好的 28.trans-通過,橫過 transcript(抄本,副本;記錄),translation(翻譯),trxnsparent(透明的),transport(運輸),trans-plant(移植) 29.Com-,con-,cor-,col-共同,和,完全 comment(評論),compile(編輯),correlation(相互關系),collect(收集),corruption(貪污腐敗),collaborate(合作,合著) 30.syn-共同 synonym(同義詞),synchronization(同步),syntonic(諧振的),synthetic(人工的,合成的) 31.meta-和,在……之後 metaphor(比喻),metaphysics(形而上學) 32.Cis-在這一邊 cisatlantic(大西洋這邊的) 33.pen- 把關入圍欄, 囚禁 peninsular(.住在半島上的居民,半島(狀)的,形成半島的) 34.en-,em-往……里,使…… encamp(扎營),enable(使……能),endear(使……受喜愛),embrace(擁抱,抓住(機會)) 35.intro內在 intracardiac(心臟內部的),intramolecular(分子內部的),intracellular(細胞內部的) 36.intro-到……中 introce(介紹),introspect(反省,內省) 37.dys-壞 dyspepsia(消化不良),dysentry(痢疾) 38.Eu-優,美好 eulogy(頌詞),euphony(悅耳的聲音) 39.ambi-,amphi-兩者 amphibian(兩棲的),ambidextrous(兩只手都很靈巧的;心懷二意的;非常靈巧的) 40.penta-五 pentagon(五角大樓),pentagram(五角星),pentameter(五步詩句) 41.sex-六 sexangle(六角),sexennial(六年一度的) 42.sept-七 September九月(古羅馬的七月),septennial(七年一度) 43.hepta-七 heptab(七個成套之物),heptagon(七角形) 44.octa-,octo,oct八 octagon(八角形),octuple(八倍)October(十月) 45.nona-,ennea-九 nonagon(九角形),ennead(九個一組) 46.deci-,deca-十 decimal(十進位的),decagramme(十克) 47.centi-百 centimeter(厘米),centipede(蜈蚣) 48.milli-千 millenary(千年的),millimeter(毫米) 49.Kilo-千 kilowatt(千瓦),kilometer(千米)
[編輯本段]後綴形式
開放分類:英語、語言 後綴是一種重要的構詞法,通過後綴我們常常可以判斷出一個詞的詞性。下面分四大類分別講解一些常見後綴及其含義:
一、名詞後綴
常見的此類後綴及其具體含義如下: 1.-ster,-eer,-er(or)意為:從事某種職業或參與某種活動的人()例詞:gamester,gangster,songster,engineer,profiteer,mountaineer,auctioneer,driver,teacher,director,actor,professor 2.-let意為:小或者不重要的東西(small,unimportantthings)例詞:booklet,leaflet,starlet 3.-ette意為:1)小的東西(small)例詞:cigarette2)假的東西(imitation)例詞:leatherette3)女性(female)例詞:usherette 4.-ess意為:女性(female)例詞:actress,poetess,hostess,paintress 5.-hood意為:時期(status;etc.)例詞:boyhood,childhood,manhood 6.-ship意為:才能,狀態,資格,品質等(skill,state,condition,status,quality)例詞:leadership,friendship,membership,lectureship,sportsmanship 7.-ful意為:量(theamountwhichnouncontains)例詞:cupful,handful,mouthful,spoonful 8.-tion,-ion意為:1)狀態,行動等(state;action;etc.)例詞:action,oppression,possession,ecation,starva-tion2)機構等(institution;etc.)例詞:organization,foundation 9.-ment意為:狀態,行動等(state;action;etc.)例詞:movement,enslavement,pavement 10.-al意為:動作(action)例詞:arrival,refusal,revival,recital,removal 11.-age意為:程度,數量等(extent;amount;etc.)例詞:wastage,coverage,acreage,shrinkage,breakage,hostage 12.-ness;-ity(ty)意為:狀態,品質(state;quality;etc.)例詞:happiness,usefulness,selfishness,kindness,rapidity,activity,sanity,changeability 13.-ism意為:道義,主義,學說等(doctrineof,practiceof)例詞:idealism,impressionism,absenteeism,racism
二、動詞後綴
常見的此類後綴及其具體含義如下: 1.-ify意為:轉為,變為(toturninto,tomakeorbecome)例詞:beautify,diversify,simplify 2.-ize;-en意為:使……,變得……(tomakeorbecome;tomakeinto)例詞:modernize,popularize,legalize,hospitalize,symbolize,ripen,widen,heighten,threaten 3.-ate意為:增加,使……(giveoradd,makeorbecome)例詞:originate,hydrogenate,validate,differentiate
三、形容詞後綴:
常見的此類後綴及其具體含義如下: 1.-ful意為:充滿,有(fullof;hav-ing;giving;etc.)例詞:useful,pitiful,hopeful,helpful,forgetful,thankful,fearful 2.-less意為:沒有,無(without;notgiving)例詞:speechless,childless,harmless,hopeless,meaningless 3.-ly意為:有……品質的(havingthequalitiesof)例詞:beastly,manly,brotherly,friendly 4.-like意為:像……的(like)例詞:childlike,statesmanlike,tiger-like 5.-y;-ish意為:像……一般的(somewhatlike)例詞:meaty,sandy,silky,hairy,leafy,watery,foolish,girlish,blackish,thinnish 6.-some意為:像……一樣的;引起……的;有……品質的(like;causing;havingthequalityof)例詞:troublesome,burdensome,wholesome,tiresome,bothersome 7.-able(ible)意為:能……的;可以……的(abletobe;capable)例詞:changeable,readable,drinkable,comfortable,expansible,convincible 8.-ed意為:有……的(having,etc.)例詞:wooded,pointed,moneyed,odd-shaped 9.-al意為:有……屬性的,……類型的(natureof,typicalof)例詞:cultural,personal,regional,musical 10.-ary(ory)意為:屬於……的,與……相連的(belongingto;connectedwith)例詞:revolutionary,imaginary,contradictory 11.-ous意為:富含……的;有……品質的;像……的(fullof;havingthequalityof;like)例詞:glorious,erroneous,malicious,gracious 12.-ic(ical)意為:……類的;屬於……的(typicalof;belongingto)例詞:historic,historical,methodic,methodical,dramatic,heroic 13.-ive意為:有……屬性的;有某種傾向的(havingthenatureorqualityof;givenortendingto)例詞:attractive,talkative,restrictive,defensive,preventive,constructive,sensitive
四、副詞後綴
常見的此類後綴及其具體含義如下: 1.-ly意為:以……方式(ina...manner;etc.) 例詞:happily,boldly,attentive-ly,strangely 2.-ward(s)意為:表示方式或動作的方向(manneranddirectionofmovement)例詞:onward(s),backward(s),earthward(s),homeward(s),eastward(s) 3.-wise意為:1)按照……方式(inthemannerof)例詞:crabwise,clockwise2)就……而言(as faras...isconcerned)例詞:weatherwise,ecationwise
[編輯本段]詞性簡寫
n.名詞 v.動詞 pron.代詞 adj.形容詞 adv.副詞 num.數詞 art.冠詞 prep.介詞 conj.連詞 interj.感嘆詞
E. 重組蛋白的組氨酸標簽 怎麼去掉
6xHis標簽可用一些酶,譬如TAGZyme去除
F. pet-32a空載體是可溶性表達嗎
該空載體緊緊會表達一段Trx標簽蛋白,加上his標簽,約20kd左右,是高度可溶的。
G. 用pET-32a表達含起始密碼子的目的蛋白時,翻譯是從載體上的起始密碼子開始還是從目的蛋白上的開始
當然是從載體上已有的融合蛋白開始,你的目的蛋白是在Trx和His-tag後面的